UV-2600 系列紫外可見分光光度計(jì)用戶使用手冊

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第一章 概述。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。 1

1．1 原理。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。1

1．2 用途。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。1

1．3 特點(diǎn)。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。1

第二章 主要技術(shù)指標(biāo)。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。2

2．1 技術(shù)指標(biāo)。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。2

2．2 隨機(jī)附件。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。2

2．3 儀器外觀。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。3

2．4 儀器安裝。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。4

第三章 儀器的基本操作。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。4

3．1 顯示屏和按鍵。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。4

3．2 儀器上電。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。5

3．3 儀器的基本操作。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。7

3．3．1 調(diào)空白。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。7

3．3．2 設(shè)置波長。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。7

3．3．3 調(diào)出，存儲(chǔ)，打印實(shí)驗(yàn)結(jié)果。。。。。。。。。。。。。。。。。。8

3．4 試驗(yàn)前的準(zhǔn)備。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。10

第四章 光度計(jì)模式。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。10

4．1 測試方法描述。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。10

4．1．1 吸光度模式。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。11

4．1．2 透過率模式。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。11

4．1．3 含量（濃度）模式。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。11

4．2 打印實(shí)驗(yàn)報(bào)告。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。13

第五章 定量測量。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。13

5．1 測量方法描述。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。13

5．1．1 選擇濃度單位。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。13

5．1．2 選擇校正方法。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。14

5．1．3 選擇曲線擬合方法。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。14

5．1．4 直接輸入標(biāo)準(zhǔn)曲線。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。15

5．1．5 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。15

5．1．6 定量測量。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。18

第六章 光譜掃描（需擴(kuò)展功能）。。。。。。。。。。。。。。。。。。。19

6．1 參數(shù)設(shè)置。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。19

6．2 掃描模式選擇。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。20

6．3 建立基線。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。20

6．4 掃描樣品。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。21

6．5 圖譜處理。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。21

6．5．1 改變標(biāo)尺。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。21

6．5．2 峰谷查尋。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。22

6．5．3 存儲(chǔ)，調(diào)入，打印掃描曲線。。。。。。。。。。。。。。。。。。23

第七章 動(dòng)力學(xué)測量（需擴(kuò)展功能）。。。。。。。。。。。。。。。。。。25

7．1 參數(shù)設(shè)置。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。253

7．2 測量模式選擇。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。25

7．3 測量步驟。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。26

7．4 反應(yīng)速率計(jì)算。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。26

7．5 圖譜處理。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。27

7．6 存儲(chǔ)，調(diào)入，打印實(shí)驗(yàn)結(jié)果。。。。。。。。。。。。。。。。。。。27

第八章 DNA/蛋白質(zhì)測量（需擴(kuò)展功能）。。。。。。。。。。。。。。。。28

8．1 參數(shù)設(shè)置。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。29

8．2 選擇測量模式。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。29

8．3 選擇濃度單位。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。30

8．4 測量步驟。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。30

8．5 恢復(fù)參數(shù)缺省值。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。31

8．6 存儲(chǔ)，調(diào)入，打印實(shí)驗(yàn)結(jié)果。。。。。。。。。。。。。。。。。。。31

第九章 多波長測量。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。32

9．1 參數(shù)設(shè)置。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。32

9．2 選擇測量模式。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。32

9．3 測量步驟。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。33

9．4 存儲(chǔ)，調(diào)入，打印測試結(jié)果。。。。。。。。。。。。。。。。。。。33

第十章 系統(tǒng)設(shè)置和儀器校正。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。34

10．1 系統(tǒng)設(shè)置。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。34

10．1．1 波長校正。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。34

10．1．2 打印機(jī)設(shè)置。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。34

10．1．3 光源管理。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。36

10．1．4 時(shí)鐘管理。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。38

10．1．5 暗電流測量。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。38

10．1．6 蜂鳴器開關(guān)。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。39

10．2 儀器校正。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。39

10．2．1 光度精度驗(yàn)證。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。39

10．2．2 波長精度驗(yàn)證。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。41

10．3 電腦連接。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。42

10．4 初始化文件。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。43

10．5 恢復(fù)缺省值。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。43

第十一章 專用實(shí)驗(yàn)（含比色皿配對試驗(yàn)）。。。。。。。。。。。。。。。44

11．1 實(shí)驗(yàn)方法描述。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。44

附錄 A 。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。474

第一章 概述

1.1 原理

分光光度法分析的原理是利用物質(zhì)對不同波長光的選擇吸收現(xiàn)象來進(jìn)行物質(zhì)的定性和定量分析，通過對吸收光譜的分析，判斷物質(zhì)的結(jié)構(gòu)及化學(xué)組成。本儀器是根據(jù)相對測量原理工作的，即選定某一溶劑（蒸餾水、空氣或試樣）作為參比溶液，并設(shè)定它的透射比（即透過率 T）為 100%，而被測試樣的透射比是相對于該參比溶液而得到的。透射比（透過率 T）的變化和被測物質(zhì)的濃度有一定函數(shù)關(guān)系，在一定的范圍內(nèi)，它符合朗伯—比耳定律。

T=I/I。

A=KCL=‐㏒ I/Io

其中 T 透射比（

透過率）

A 吸光度

C 溶液濃度

K 溶液的吸光系數(shù)

L 液層在光路中的長度

I 光透過被測試樣后照射到光電轉(zhuǎn)換器上的強(qiáng)度

Io 光透過參比測試樣后照射到光電轉(zhuǎn)換器上的強(qiáng)度

UNICO UV-2600 系列紫外可見分光光度計(jì)就是根據(jù)這一原理，結(jié)合現(xiàn)代

精密光學(xué)和最新微電子等高新技術(shù)，研制開發(fā)的具有水平的新一

代高級分光光度計(jì)。

1.2 用途

可供物理學(xué)、化學(xué)、醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、藥物學(xué)、地質(zhì)學(xué)等學(xué)科進(jìn)行科學(xué)研究，是廣泛應(yīng)用于化工、藥品、生化、冶金、輕工、材料、環(huán)保、醫(yī)學(xué)化驗(yàn)等行業(yè)及分析行業(yè)中最重要的質(zhì)量控制儀器之一，是常規(guī)實(shí)驗(yàn)室的儀器。

1.3 特點(diǎn)

UV-2600 系列紫外可見分光光度計(jì)具有以下特點(diǎn)：

采用低雜散光，高分辯率的單光束光路結(jié)構(gòu)單色器，儀器具有良好的穩(wěn)定性，重現(xiàn)性和精確的測量讀數(shù)。

設(shè)有固定式狹縫 4nm 或 1.8nm 和可變式狹縫 0.5nm、1nm、2nm、4nm

等多種不同款式供您選擇，以滿足不同分析測試項(xiàng)目對單色帶寬的要求。

采用最新微處理機(jī)技術(shù)，不僅使儀器具有自動(dòng)設(shè)置 0%T 和 100%T 等控

制功能以及多種方法的濃度運(yùn)算和數(shù)據(jù)處理功能，同時(shí)還具有防止使用者操

作錯(cuò)誤的特殊功能，使用時(shí)無后顧之憂。

科學(xué)的設(shè)計(jì)，新技術(shù)的運(yùn)用，將光、機(jī)、電以及微機(jī)技術(shù)有機(jī)的結(jié)合在

一起，使儀器的穩(wěn)定性指標(biāo)接近或達(dá)到高級型紫外可見分光光度計(jì)的水平。

大屏幕圖形液晶顯示器，不僅可以顯示數(shù)據(jù)，也可以顯示圖譜，豐富的

機(jī)內(nèi)軟件，可以完成定量分析，定性分析，動(dòng)力學(xué)，多波長，DNA/Protein

等測試，再加上強(qiáng)大的存儲(chǔ)與打印功能，做到了不連計(jì)算機(jī)即可完成所有的

測試，分析與數(shù)據(jù)輸出。

儀器還可選配可在 Win9x 操作平臺(tái)上運(yùn)行的 UNICO 用戶應(yīng)用軟件，使

儀器具有更大的功能。5

第二章 主要技術(shù)指標(biāo)

2.3 儀器外觀

見圖 1，圖 2

內(nèi)置打印機(jī)蓋

2.4 儀器安裝

1. 開箱后，對照裝箱單仔細(xì)核對箱內(nèi)物件是否齊全并完好無損；

2. 將儀器放置于水平平臺(tái)上，儀器應(yīng)避免陽光直射，遠(yuǎn)離電磁發(fā)射裝置和

大功率電氣裝置，使用環(huán)境不能有塵埃，腐蝕性氣體和振動(dòng)；

3. 儀器周圍不能有任何障礙影響儀器周圍空氣的流動(dòng)；

4. 用 UNICO 公司隨機(jī)提供的電源線并確認(rèn)電源插座有完好的接地線；

5. 儀器通后須預(yù)熱至少 20 分鐘才可做測試。

第三章

儀器的基本操作

3.1 顯示屏和按鍵

下圖是顯示屏和按鍵示意圖 3：

UV-2600 顯示屏和按鍵

圖 38

按鍵描述

【LOAD】

數(shù)據(jù)調(diào)出鍵;

【SAVE】

數(shù)據(jù)存儲(chǔ)鍵;

【SETλ】

設(shè)置波長鍵;

【0Abs/100%T】 調(diào) 100%T/0Abs，和建用戶基線鍵;

【PRINT】

打印輸出鍵； 

【START】

試驗(yàn)或測試啟動(dòng)鍵;

【ESC/STOP】

退回前屏顯示或取消當(dāng)前操作;

【ENTER】

輸入確認(rèn)鍵;

【F1】-【F4】

功能鍵與屏幕上顯示相對應(yīng);

【0】-【9】

數(shù)字及字母鍵;

【+/-/.】

正負(fù)號和小數(shù)點(diǎn)

【CLEAR】

清屏，清掉當(dāng)前的輸入數(shù)據(jù)，刪除文件;

【＜】,【＞】

修改 X 坐標(biāo)，逐點(diǎn)觀察數(shù)據(jù);

修改 Y 坐標(biāo), 逐點(diǎn)觀察峰值，輸入大小寫字母改變

設(shè)置樣品槽位置

（在安裝有 8 聯(lián)架的情況下）.

3.2 儀器上電

給儀器通上電（每次關(guān)電后，不要立即上電，應(yīng)等待至少 10 秒時(shí)間），測試前

需讓儀器至少預(yù)熱 15 分鐘。

注意:1. 上電后,儀器會(huì)自動(dòng)自檢并初始化.檢查內(nèi)存 (圖 4), 按任意鍵可跳

過這一步，待初始化完成后，儀器將預(yù)熱 15 分鐘，（圖 5），15 分鐘到或按

【ESC/STOP】跳過到圖 6，屏幕最底行會(huì)顯示：重新校刻系統(tǒng)?否（圖 6) ,選“是"

做系統(tǒng)校刻(圖 7 推薦選是)，選 “否"跳過.,三聲鳴叫，進(jìn)入主顯示界面（圖 8)；

2．如果內(nèi)存中數(shù)據(jù)已丟失，儀器將直接校刻系統(tǒng)

3．如果儀器沒有安裝自動(dòng)樣品架，圖 8 中“樣品架 #1"將不會(huì)顯示。不會(huì)

顯示。

圖 4

注意：若 15 分鐘不能自動(dòng)跳過，則是機(jī)內(nèi)時(shí)鐘停止所致，請按【ESC/STOP】手動(dòng)跳

過，并在“系統(tǒng)設(shè)置"中對時(shí)鐘進(jìn)行設(shè)置，參見 10.1.4 所述

3.3 儀器的基本操作

3.3.1 調(diào)空白

2 讓盛參比液的比色皿入光路；

2 按【0Abs/100%T】鍵調(diào)空白。

注意:1.如果參比液太濃， “能量不足……"將顯示在屏幕的右上角(圖 9).如果“能

量過低……"顯示在屏幕的右上角，試驗(yàn)將會(huì)中止，告警符號.“Warning…"

將顯示在屏幕中央(圖 10).

2.如果沒有安裝自動(dòng)樣品架 ，圖 10 中，“樣品架 #1" 和 “Max E"將不

會(huì)出現(xiàn)。

3.3.2 設(shè)置波長

在 “光度計(jì)模式"中設(shè)置波長步驟如下：

2 按【SETλ】鍵(圖 11).11

2 屏幕下部會(huì)出現(xiàn)對話條 (圖 12).用數(shù)字鍵輸入欲去波長 450nm.

波長 : 656.1nm 12: 35: 27

0.001 Abs

D2

W

樣品架#1

Max E

2 按 【ENTER】 鍵確認(rèn)。波長從 656.1nm 走到 450.0nm,然后自動(dòng)

調(diào)空白一次，最后屏幕顯示如圖 13.

圖 13

3.3.3 調(diào)出，存儲(chǔ)，打印實(shí)驗(yàn)結(jié)果

a. 例如在“光譜掃描"中調(diào)出曲線的步驟如下：

按【LOAD】鍵.屏幕最底行將顯示內(nèi)存中的第一個(gè)文件 ABC.wav(圖 14),

這時(shí)：

1．

按【∧】鍵或【∨】鍵可以查看內(nèi)存中的文件

2．

按 【ENTER】鍵可將當(dāng)前的文件調(diào)入屏幕 (圖 15).只是要注

意，所選中的文件，其擴(kuò)展名必須是 wav.否則，會(huì)顯示出：“文

件類型錯(cuò)誤…".各種測試下存儲(chǔ)文件所對應(yīng)的擴(kuò)展名見表 1 所

示。

3．

按【CLEAR】鍵，屏幕最底行將顯示“你確認(rèn)嗎?否"，按【∧】

鍵或【∨】鍵，屏幕最底行將顯示“你確認(rèn)嗎?是"這時(shí)如果你12

按【ENTER】確認(rèn)，將會(huì)清除掉所選中的當(dāng)前文件。

試驗(yàn)

存儲(chǔ)文件擴(kuò)展名

定量測量標(biāo)準(zhǔn)曲線

***.fit

定量測量試驗(yàn)結(jié)果

***.qua

光譜掃描

***.wav

動(dòng)力學(xué)測量

***.kin

DNA/蛋白質(zhì)測量

***.dna

多波長測量

***.mul

在“光譜掃描"中存入曲線的步驟如下：

2 按【SAVE】鍵. 屏幕行顯示“請輸入文件名？"

2 用數(shù)字鍵輸入字母或數(shù)字如：XYZ (圖 15), 按【ENTER】確認(rèn)存入.。

注意，文件名最長三個(gè)字符。

注意:1. 連續(xù)按數(shù)字鍵（兩次按鍵間隔小于 0.5 秒）可輸入字母或字符，按【∧】

鍵或【∨】鍵可改變字母的大小寫。數(shù)字鍵所對應(yīng)的字符見表 2。

表 2

數(shù)字鍵

可代表的字符

數(shù)字鍵

可代表的字符

數(shù)字鍵

2 .若輸入的文件名與已存儲(chǔ)的某個(gè)文件重名，屏幕行顯示“文件重

名，你確認(rèn)嗎?否" 按【∧】鍵或【∨】鍵，屏幕最底行將顯示“文

件重名，你確認(rèn)嗎?是"這時(shí)如果按【ENTER】確認(rèn)，以前的同名

文件將會(huì)被覆蓋。

注意：1。儀器內(nèi)用于存放實(shí)驗(yàn)結(jié)果的存儲(chǔ)器，由于其容量和可靠性都不如 PC

機(jī)，所以，對于重要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，強(qiáng)烈建議及時(shí)打印或上傳至 PC 機(jī)

內(nèi)保存，以免給您帶來意外的麻煩；

2．儀器內(nèi)的存儲(chǔ)器，同 PC 機(jī)的硬盤存儲(chǔ)器一樣，反復(fù)地存取會(huì)導(dǎo)致效

率降低，甚至無法存取，強(qiáng)烈建議定期對其做總清，即格式化，見 10.4

所述。

c. 打印實(shí)驗(yàn)報(bào)告

在“光度計(jì)模式"圖 16 中按【PRINT】鍵，打印出試驗(yàn)結(jié)果如圖 17 所示

按【PRINT】鍵，即可打印報(bào)告（圖 17).

3.4 試驗(yàn)前的準(zhǔn)備 

? 將試驗(yàn)用比色皿或試管用蒸餾水或其他專門的清洗劑清洗干凈，并用 

柔軟的棉布或紙巾將其表面的手指印或滴液擦試干凈；

? 將盛參比液的比色皿放入 4 聯(lián)手動(dòng)樣品架最靠近你的槽位中，再將推桿向前

推到頭使比色皿正對光路，關(guān)上樣品室蓋；

第四章 光度計(jì)模式

UV-2600 系列分光光度計(jì)為用戶提供了多種不同的分析方法。光度計(jì)模式是其

中最為基本的測試模式。

4．1 測試方法描述

將參比液推入光路. 在圖 7 主菜單中按【1】鍵便進(jìn)入“光度計(jì)模式" 測試界面. 進(jìn)

入后儀器會(huì)自動(dòng)調(diào)空白一次，然后屏幕顯示如圖 18，如儀器安裝有自動(dòng)樣品架

0 %T 120.014

屏幕顯示如圖 19.接下來可作進(jìn)一步的操作，若按【ESC/STOP】則回到主菜單.

注意: 若儀器沒有安裝自動(dòng)樣品架“樣品架 #1"和 “Max E"將不顯示。

通過按【F2】，共有三種測試模式供選擇，分別為：吸光度，透過率，含量.

圖 20

4．1．1 吸光度模式

參比液入光路.按【F2】后按【∧】或【∨】選擇吸光度模式，按 【ENTER】

確認(rèn),按【0Abs/100%T】校準(zhǔn)空白,最后將測試樣品拉入光路，讀取試驗(yàn)結(jié)

果(圖 20)。

4．1．2 透過率模式

參比液入光路.按【F2】后按【∧】或【∨】選擇透過率模式，按 【ENTER】

確認(rèn),按【0Abs/100%T】校準(zhǔn)空白,最后將測試樣品拉入光路，讀取試驗(yàn)結(jié)

果。.

4．1．3 含量（濃度）模式

按 【F1】后按【∧】或【∨】 選擇濃度單位，按 【ENTER】確認(rèn)(圖 21). 15

若沒有你所需要的濃度單位，可選擇 “自定義 ", 按 【ENTER】確認(rèn)后，

通過輸入數(shù)字或字母自定義濃度單位，再按 【ENTER】確認(rèn)，圖 22。

參比液入光路按【0Abs/100%T】調(diào)空白.接下來又兩種測量濃度的方法:

a. 按【F3】直接輸入已知濃度因子 F 的值后, 按 【ENTER】確認(rèn)，圖 23. 然

后將待測溶液拉入光路讀取濃度值 ；

b. 將已知濃度值的標(biāo)準(zhǔn)溶液拉入光路中，按【F4】輸入標(biāo)液濃度值后按按

【ENTER】確認(rèn)，圖 24. 然后將待測溶液拉入光路讀取濃度值 ；

注意:1.要選擇波長，可于任何時(shí)候按【SETλ】并輸入波長值后按

【ENTER】確認(rèn)來進(jìn)行，波長選定后，儀器總是自動(dòng)調(diào)空白一次；

2.如果濃度因子的值 F 大于 9999,將顯示 “數(shù)據(jù)越限"的信息。

圖 24

4．2 打印實(shí)驗(yàn)報(bào)告

按【PRINT】可打印實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖 25.

圖 25

第五章 定量測量

主界面中按【2】直接進(jìn)入“定量測量" 界面如圖 26. 按【ESC/STOP】退回到主

界面.

注意: . 若儀器沒有安裝自動(dòng)樣品架“樣品架 #1"和 “Max E"將不顯示。

圖 26

5．1 測量方法描述

5．1．1 選擇濃度單位17

按【F1】選擇濃度單位，圖 27，方法如 4．1．3 所述。

圖 27

5．1．2 選擇校正方法

按【SETλ】選擇校正方法.UV-2600 系列分光光度計(jì)提供三種校正

方法供選擇，分別是：單波長法，等吸收點(diǎn)雙波長法和三波長法，

圖 28.

注意:三種方法的介紹參考附錄 C.

圖 28

5．1．3 選擇曲線擬合方法

在圖 26 中按【F2】進(jìn)入圖 29 顯示界面.

圖 29

按【1】選擇擬合方法.有四種方法供你選擇：一階線性擬合，一階線性過18

零擬合，二階擬合以及三階擬合.

5．1．4 直接輸入標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖 29 中，按【F2】可以直接輸入一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，圖 29A 所示.

圖 29A

注意：所輸入的因子個(gè)數(shù)與所選擇的曲線擬合方法有關(guān)，下表是其對應(yīng)關(guān)系：

曲線擬合方法

曲線方程表達(dá)式

所需輸入的因子數(shù)

一階線性過零擬合

C=K1×A

K1, r*

一階線性擬合

C=K0+K1×A

K0,K1,r*

二階擬合

C=K0+K1×A+K2×A2

K0,K1,K2

三階擬合

C=K0+K1×A+K2×A2+K3×A3

K0,K1,K2,K3

* r 為線性回歸相關(guān)系數(shù)

5．1．5 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖 29 中，按【F3】鍵可以通過測試一組標(biāo)準(zhǔn)樣品建立一條標(biāo)準(zhǔn)曲線. 見圖

30 所示.

a.用數(shù)字鍵直接輸入標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度值。按【∧】或【∨】鍵可選擇修改已

輸入標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度值 ，見圖 31.

按【ESC/STOP】結(jié)束本次修改并退出.

b. 參比液拉入光路后按【0Abs/%100T】,儀器將分別走到選定的波長

（根據(jù)選定的校正方法不同可能是單波長，雙波長或三波長）處并調(diào) 

空白。圖 32 示.

將各標(biāo)準(zhǔn)樣品逐個(gè)拉入光路按【START】鍵一步一步測得標(biāo)樣的 A 值，

c. 按【F4】鍵可以畫出曲線。這時(shí)可以通過按【F1】鍵選擇不同的擬

合方法來得到不同的擬合曲線見圖 34，圖 35，圖 36，圖 37 所示.

注意：若樣品數(shù)較少，選擇二階，特別是三階曲線擬合會(huì)得到無效

的結(jié)果。20

這時(shí)按【PRINT】鍵可將曲線打印出來，按【ESC/STOP】鍵退到前

級界面。 然后，按【SAVE】鍵并命名后可將曲線存儲(chǔ)起來。

5．1．6 定量測量

第一步，獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線

有三種獲得做定量測量用標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法，分述如下：

注意：做定量測量應(yīng)在圖 26 的顯示界面下進(jìn)行。

a. 調(diào)入存儲(chǔ)于機(jī)內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行測試

在圖 33 的顯示界面下按【LOAD】鍵. 按【∧】或【∨】鍵選擇后綴

擴(kuò)展名為***.fit 的文件，按【ENTER】確認(rèn)調(diào)入。然后，按

【ESC/STOP】鍵退回到前級界面（圖 26）下進(jìn)行試驗(yàn)。

b. 用已知標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行試驗(yàn).

在圖 33 的顯示界面下按【F2】鍵，然后直接輸入標(biāo)準(zhǔn)曲線的各項(xiàng)系

數(shù)即可。然后，按【ESC/STOP】鍵退回到前級界面（圖 26）下進(jìn)

行試驗(yàn)。

注意：在輸入標(biāo)準(zhǔn)曲線前，必須根據(jù)已知的標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過按【F1】

選定擬合方式，比如，已知的標(biāo)準(zhǔn)曲線為二階曲線，就必須選

二階擬合。

c. 用新建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線做實(shí)驗(yàn)

如上 5.1.5 所述，已建立了一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，按【ESC/STOP】鍵退回

到前級界面（圖 26）下即可進(jìn)行試驗(yàn)。

第二步，將參比液拉入光路后，按【0Abs/100%T】鍵調(diào)空白.

第三步，將待測樣品拉入光路后，按【START】鍵,測試結(jié)果就顯示在屏

幕上。圖 38 示.

第四步，打印，存儲(chǔ)，調(diào)出試驗(yàn)結(jié)果

按【PRINT】鍵即可打印出試驗(yàn)報(bào)告圖 39 示.22

在圖 38 中按【SAVE】鍵，輸入文件名后按【ENTER】確認(rèn)即完成存儲(chǔ)。

在圖 38 中按【LOAD】，再按【∧】或【∨】鍵選擇后綴擴(kuò)展名為***.qua

的文件，按【ENTER】確認(rèn)調(diào)入已存文件.

第六章 光譜掃描

主界面中按【3】直接進(jìn)入“光譜掃描" 界面如圖 41 所示. 按【ESC/STOP】

退回到主界面.

6．1 參數(shù)設(shè)置

按【F1】設(shè)置掃描參數(shù),包括掃描的開始波長,結(jié)束波長，掃描間隔和

掃描速度. 按【∧】或【∨】鍵可選擇 Y 軸標(biāo)尺，圖 42 示。

注意:（1）由于儀器總是從高波長掃到低波長，所以設(shè)置掃描的開始波

長要大于結(jié)束波長；

（2）掃描間隔只能是 0.1nm, 0.2nm,0.5nm,1nm ,2nm 和 5nm.每

次掃描能處理的數(shù)據(jù)點(diǎn)數(shù)最多 3000 點(diǎn)，所以當(dāng)掃描范圍設(shè)得大

時(shí)，掃描間隔就不能設(shè)得過小；

（3）掃描速度為 “高速", “中速"和 “低速"三檔可選.

6．2 掃描模式選擇

圖 41 中按【F2】可選擇測量模式，有 "Abs" , “%T" 和“E" 三種模式可選，

6．3 建立基線

將參比液拉入光路后，按【0Abs/100%T】鍵調(diào)空白建立基線(圖 44). 按

【ESC/STOP】鍵可以停止掃描;

6．4 掃描樣品

將待分析樣品拉入光路后，按【START】鍵進(jìn)行樣品掃描。掃描過程中

按 【ESC/STOP】鍵可以停止掃描(圖 45).掃描結(jié)束蜂鳴器響三聲。

6．5 圖譜處理

6．5．1 改變標(biāo)尺

掃描結(jié)束后按【＜】或 【＞】鍵可以改變 X 軸標(biāo)尺而按【∧】或【∨】

鍵可以改變 Y 軸標(biāo)尺，如圖 47，圖 48 所示。圖 48 只是圖 47 的一部分.

6．5．2 峰谷查詢

按【F3】鍵進(jìn)入圖 49 所示界面，進(jìn)行峰谷檢索，儀器設(shè)計(jì)有兩類檢索

供你選擇：

a.逐點(diǎn)檢索：按【＞】鍵從左到右逐點(diǎn)檢索，按【＜】鍵從右到左逐點(diǎn)

檢索 。檢索步距與掃描間隔一致。檢索數(shù)據(jù)顯示在顯示屏的第一行。.

b.逐點(diǎn)峰谷檢索：按【∧】鍵從左到右逐點(diǎn)進(jìn)行峰谷檢索，按【∨】鍵

從右到左逐點(diǎn)進(jìn)行峰谷檢索，檢索數(shù)據(jù)同樣顯示在顯示屏的第一行。

注意；圖 49 中按 【F1】鍵可設(shè)置逐點(diǎn)峰谷檢索的檢索高度，該值越

小檢索到的峰谷點(diǎn)越多，反之亦然。

6．5．3 存儲(chǔ),調(diào)入，打印掃描曲線

a. 如圖 46 已完成某一樣品的掃描圖譜，按【SAVE】鍵，輸入文件名

后按【ENTER】確認(rèn)即完成圖譜存儲(chǔ).

b. 在圖 41 中，按【LOAD】鍵，再按【∧】或【∨】鍵選擇后綴擴(kuò)展

名為***.wav 的文件，按【ENTER】確認(rèn)調(diào)入已存掃描曲線.

c. 圖 46 中按【PRINT】鍵即可打印出掃描曲線，圖 52 所示.

第七章 動(dòng)力學(xué)測量

主界面中按【4】直接進(jìn)入“動(dòng)力學(xué)測量" 界面如圖 53 所示. 按【ESC/STOP】

退回到主界面.

7．1 參數(shù)設(shè)置

在圖 53 之顯示界面下按【F1】設(shè)置試驗(yàn)參數(shù),包括總運(yùn)行時(shí)間，延

時(shí)時(shí)間和時(shí)間間隔. 按【∧】或【∨】鍵可選擇 Y 軸標(biāo)尺，圖 54 示.

7．2 測量模式選擇

按【F2】可選擇試驗(yàn)?zāi)Ｊ剑拔舛?模式或“透過率"模式，圖 55 所示.

7．3 測量步驟

a.按【SETλ】選擇好試驗(yàn)波長.拉參比液入光路后按【0Abs/100%T】

鍵調(diào)空白。

b.拉待測樣品入光路后案【START】鍵即開始對樣品作時(shí)間掃描，掃

描進(jìn)行中，按【ESC/STOP】鍵可以中止掃描，掃描完成會(huì)伴隨三

聲蜂鳴器鳴叫提示，圖 56 示

7．4 反應(yīng)速率計(jì)算

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后。可按【F3】鍵做動(dòng)力學(xué)反應(yīng)速率計(jì)算，輸入計(jì)算起始點(diǎn)

和結(jié)束點(diǎn)之時(shí)間值，和計(jì)算因子 F 的值后按【ENTER】鍵確認(rèn)，反應(yīng)

速率即可算出，圖 57，圖 58 所示。

注意: I.U.=F ×ΔA/分鐘

7．5 圖譜處理

要改變 X 軸或 Y 軸標(biāo)尺，參考光譜掃描中之 6．5．1

按【F4】鍵可做數(shù)據(jù)檢索，參考光譜掃描中之 6．5．2

7．6 存儲(chǔ),調(diào)入,打印實(shí)驗(yàn)結(jié)果

a. 如圖 58 已完成某一樣品的動(dòng)力學(xué)曲線，按【SAVE】鍵，輸入文

件名后按【ENTER】確認(rèn)即完成該曲線的存儲(chǔ).

b. 在圖 53 中，按【LOAD】鍵，再按【∧】或【∨】鍵選擇后綴擴(kuò)

展名為***.kin 的文件，按【ENTER】確認(rèn)調(diào)入已存動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)

曲線.

c. 打印動(dòng)力學(xué)曲線

圖 58 中按【PRINT】鍵即可打印出動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)曲線，圖 59 所示.

第八章 DNA/蛋白質(zhì)測量

主界面中按【5】直接進(jìn)入“DNA/蛋白質(zhì)測量" 界面如圖 60 所示. 按【ESC/STOP】

退回到主界面.

8．1 參數(shù)設(shè)置

按【F1】鍵選擇計(jì)算因子 f1-f4 圖 61 所示.機(jī)內(nèi)已駐入了計(jì)算因子的缺

省值，但允許用戶輸入不同的計(jì)算因子。

8．2 選擇測量模式

按【F2】鍵選擇測量模式. "吸光度差 1"模式或"吸光度差 2"模式被選

定后，再選擇是否"測量背景"。"吸光度差 1"模式的測量波長為 260nm

和 280nm 背景波長為 320nm (任選), "吸光度差 2"模式的測量波長為

260nm 和 230nm 背景波長仍為 320nm (任選)圖 62，圖 63 所示.

8．3 選擇濃度單位

按【F3】鍵選擇濃度（含量）單位(圖 64).

8．4 測量步驟

a. 參比液拉入光路中，按【0Abs/100%T】鍵調(diào)空白。

b. 待測樣品拉入光路中，按【START】 鍵開始測量。最后測量結(jié)果

顯示如圖 65。

c. 若在上述設(shè)置下有多個(gè)樣品要測試，只需再按【START】鍵即可.34

d. 按【＜】或【＞】鍵可以查看多個(gè)樣品的測試結(jié)果，直接輸入樣品

編號數(shù)即可，比如 3，圖 66 所示, 也可按【∧】和【∨】鍵逐個(gè)

查看測試結(jié)果。

8．5 恢復(fù)參數(shù)缺省值

若對測試參數(shù)做過修改，包括對計(jì)算因子 f1-f4 的修改或是對測試波長，

背景波長的修改，按【F4】鍵即可將它們恢復(fù)。

8．6 存儲(chǔ),調(diào)出,打印測試結(jié)果

a. 圖 65 中，按【SAVE】鍵，再輸入文件名后按【ENTER】確認(rèn)即完

成測試結(jié)果的存儲(chǔ).

b. 圖 60 中，按【LOAD】鍵，再按【∧】或【∨】鍵選擇后綴擴(kuò)展名

為***.dna 的文件，按【ENTER】確認(rèn)即調(diào)出已存的測試結(jié)果.

c. 圖 65 中，按【PRINT】鍵即可打印出測試報(bào)告，圖 67.

圖 6735

第九章 多波長測量

主界面中按【6】直接進(jìn)入“多波長測量" 界面如圖 68 所示. 按【ESC/STOP】

退回到主界面..

9．1 參數(shù)設(shè)置

按【F1】鍵進(jìn)入波長輸入編輯界面，輸入波長后按【ENTER】確認(rèn)(圖

69).按【∧】或【∨】鍵可輸入更多的波長。按【CLEAR】鍵可以清

掉已輸入的波長。按【ESC/STOP】鍵退出該界面。

注意:建議最大的波長第一個(gè)輸入.

9．2 選擇測量模式

按【F2】鍵選擇測量模式，圖 70 示.

9．3 測量步驟

a. 參比液拉入光路中，按【0Abs/100%T】鍵調(diào)空白.

b. 待測樣品拉入光路中，按【START】 鍵開始測量。一組波長測完，

總是回到第一個(gè)波長處。最后測量結(jié)果顯示如圖 71.

c. 若在上述設(shè)置下有多個(gè)樣品要測試，只需再按【START】鍵即可.

d. 按【＜】或【＞】鍵可以查看多個(gè)樣品的測試結(jié)果，直接輸入樣

品編號數(shù)即可, 也可按【∧】和【∨】鍵逐個(gè)查看測試結(jié)果。

9．4 存儲(chǔ)，調(diào)出，打印測試結(jié)果

a. 圖 71 中，按【SAVE】鍵，再輸入文件名后按【ENTER】確認(rèn)即完

成測試結(jié)果的存儲(chǔ)

b. 圖 68 中，按【LOAD】鍵，再按【∧】或【∨】鍵選擇后綴擴(kuò)展名

為***.mul 的文件，按【ENTER】確認(rèn)即調(diào)出已存的測試結(jié)果

c. 圖 71 中，按【PRINT】鍵即可打印出測試報(bào)告，圖 72 所示。.37

圖 72

第十章 系統(tǒng)設(shè)置和儀器校正

主界面中按【7】直接進(jìn)入“系統(tǒng)設(shè)置" 界面如圖 73 所示. 按【ESC/STOP】退

回到主界面.

10.1 系統(tǒng)設(shè)置

10．1．1 波長校正

圖 73 界面下按【1】鍵進(jìn)行波長重新校正.當(dāng)懷疑儀器波長不準(zhǔn)時(shí)應(yīng)執(zhí)行

此項(xiàng)。

10．1．2 打印機(jī)設(shè)置

按【2】鍵設(shè)置打印機(jī) 圖 75. 按【ESC/STOP】鍵返回前級界面。 

a. 圖 75 中按【1】鍵對打印機(jī)復(fù)位。

b. 圖 75 中按【2】鍵選擇打印口。有并口和串口兩個(gè)選擇。圖 76 示.

c. 圖 75 中按【3】鍵 選擇打印機(jī)，有 HP PCL 語言兼容（黑白）打

印機(jī)，HP PCL 語言兼容（彩色）打印機(jī)，Epson ESC/P 語言兼容

打印機(jī)和 Epson/P2 兼容打印機(jī)供選擇，圖 77 所示.

d. 圖 75 中按【4】鍵選擇打印模式，有“打印報(bào)表"模式和“打印屏幕"

模式供選擇，選擇“打印屏幕"模式，在屏幕的第一行會(huì)顯示一個(gè)小

圖標(biāo)，圖 78 所示,選擇“打印報(bào)表"模式，則沒有這個(gè)小圖標(biāo).39

10．1．3 光源管理

圖 73 中按【3】鍵進(jìn)行燈源設(shè)置，圖 79 示. 按【ESC/STOP】

鍵返回前級界面.

a. 圖 79 中按【1】鍵可開關(guān)氘燈，圖 80 示.

b. 圖 79 中按【2】鍵經(jīng)確認(rèn)可將氘燈已使用時(shí)間清零，圖 81 所示.40

c. 圖 79 中按【3】鍵可開關(guān)鎢燈，圖 82 示.

d. 圖 79 中按【4】鍵經(jīng)確認(rèn)可將鎢燈已使用時(shí)間清零，圖 83 所示.

e. 圖 79 中按【5】鍵 可設(shè)置氘燈鎢燈切換波長，圖 84 所示.

10．1．4 時(shí)鐘管理

圖 73 中按【4】鍵可調(diào)整時(shí)鐘 圖 85. 按【ESC/STOP】鍵返回前

級界面.

a. 圖 85 中按【1】鍵可設(shè)置時(shí)間，圖 86 示.時(shí)間的輸入格式為：**（時(shí)）。

**（分）。**（秒），比如輸入：18.4.35 代表下午 6 點(diǎn)零 4 分 35 秒。

】鍵可設(shè)置日期，日期的輸入格式為：**（年）.**（月）.**(日),

比如輸入： 3.8.28 代表 2003 年 8 月 28 日。

c. 圖 85 中按【3】鍵 ，在屏幕的右上角顯示時(shí)間。

d. 圖 85 中按【4】鍵 ，在屏幕的右上角顯示日期（圖 87).

10．1．5 暗電流測量

圖 73 中按【5】鍵可做暗電流測量 圖 88. 按【ESC/STOP】鍵返

回前級界面。42

10．1．5 蜂鳴器開關(guān)

圖 73 中按【8】鍵，可關(guān)掉按鍵的聲響，再按又可打開此聲響

10．2 儀器校正

10．2．1 光度精度驗(yàn)證

圖 73 中按【6】鍵可做光度精度驗(yàn)證 圖 89. 按【ESC/STOP】

鍵返回前級界面。驗(yàn)證步驟分述如下：

a. 圖 89 中按 【SETλ】 可選擇在何種波長下進(jìn)行光度精度驗(yàn)證。輸

入波長后，按【ENTER】確認(rèn)。波長可以是一個(gè)，也可以是多個(gè)。圖

90 示。

b. 按【F1】鍵進(jìn)入“標(biāo)樣設(shè)置" 編輯界面，輸入標(biāo)樣后按【ENTER】

確認(rèn)(圖 91).按【∧】或【∨】鍵可輸入更多的標(biāo)樣。按【CLEAR】

鍵可以清掉已輸入的標(biāo)樣。按【ESC/STOP】鍵退出該界面.

】鍵可選擇測試模式(吸光度或透過率)，圖 92.

d. 按【F3】鍵設(shè)置誤差范圍(圖 93). 輸入數(shù)值按【ENTER】鍵即可。

e. 按【0Abs/100%T】鍵調(diào)空白.

f. 將樣品(中性濾光片或其他標(biāo)準(zhǔn)樣品)拉入光路.按【START】鍵開始44

做校驗(yàn)測試. 結(jié)果顯示如圖 94. 假如實(shí)測值和標(biāo)準(zhǔn)值之差在所設(shè)定的

誤差范圍內(nèi)，結(jié)果顯示“Pass"，若在誤差范圍以外，結(jié)果顯示“Fail"

g．按【PRINT】鍵可打印出測試報(bào)告。

10．2．2 波長精度驗(yàn)證

圖 79 中按【7】鍵可做波長精度驗(yàn)證 圖 95. 按【ESC/STOP】鍵

返回前級界面.驗(yàn)證步驟分述如下：

a. 按【F1】設(shè)置極值處波長。輸入波長后按【ENTER】確認(rèn)(圖 96).

按【∧】或【∨】鍵可輸入更多的波長。按【CLEAR】鍵可以清掉已

輸入的波長。按【ESC/STOP】鍵退出該界。

b. 按【F2】鍵可選擇測試模式(吸光度或透過率)。（圖 97).45

c. 按【F3】鍵設(shè)置誤差范圍(圖 98). 輸入數(shù)值按【ENTER】鍵即可。

d. 按【0Abs/100%T】鍵調(diào)空白.

將樣品（通常是鈥溶液）拉入光路按【START】鍵，開始做驗(yàn)證

測試，儀器將找出的極值點(diǎn)波長列出，并與已輸入的波長作比較假，

如二者在所設(shè)定的誤差范圍內(nèi)，結(jié)果顯示“Pass"，若在誤差范

圍以外，結(jié)果顯示“Fail"。

e. 按【PRINT】鍵可打印出測試報(bào)告

10．3 電腦連接

圖 79 中按【8】鍵 準(zhǔn)備將儀器的操作權(quán)交 PC 機(jī)控制，等待來自 PC

機(jī)的命令，圖 100A 所示, 按【ESC/STOP】鍵可退出。一旦收到 PC 機(jī)46

的聯(lián)機(jī)命令，控制權(quán)就交給 PC 機(jī)，圖 100B 所示。

10．4 初始化文件

圖 73 中按【F1】鍵 并組合運(yùn)用【∧】【∨】【ENTER】鍵可將已存

儲(chǔ)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果全部清除，但需要兩次確認(rèn)以防意外清除.

10．5 恢復(fù)缺省值

圖 73 中按【F2】鍵 恢復(fù)機(jī)內(nèi)缺省值.

機(jī)內(nèi)一些主要的缺省值分列如下：

氘燈鎢燈切換波長：339nm;

濃度因子：1;

定量測試：單波長法，波長 546nm,一階過零擬合;

光譜掃描：掃描范圍 900nm-600nm,掃描間隔 0 掃描速度：高速，掃描模

式：吸光度，顯示范圍：0-3A，找峰高度：0.030A;

動(dòng)力學(xué)測量：測量時(shí)間：180 秒，測量間隔：1 秒，延遲時(shí)間：3 秒，測

量模式：吸光度，顯示范圍：0-3A；

DNA/蛋白質(zhì)測量：測量波長：280nm,260nm,參考波長：320nm,計(jì)算因

子：f1=62.90,f2=36,f3=1552,f4=757.3,濃度單位：ug/ml;

打印機(jī)：標(biāo)準(zhǔn)并口，微型打印機(jī)（SPRT SP T），打印報(bào)表模式；

時(shí)鐘：時(shí)間顯示模式；

光度精度：吸光度模式誤差范圍：0.008A,透過率模式誤差范圍：0.5%T;

波長精度：誤差范圍：0.8nm;

蜂鳴器開關(guān)：開。47

第十一章 專用試驗(yàn)（含比色皿配對試驗(yàn)）

11．1 實(shí)驗(yàn)方法描述

注意：該項(xiàng)應(yīng)用需安裝自動(dòng)樣品架

主界面中按【8】鍵直接進(jìn)入“專用試驗(yàn)" 界面如圖 101 所示. 按【ESC/STOP】

退回到主界面.實(shí)驗(yàn)方法分述如下：

a. 按【F1】鍵 設(shè)置實(shí)驗(yàn)方法 (圖 102). 有四種方法供選擇：單參比單

樣品 ，一參比二樣品，一參比三樣品，四參比四樣品(即比色皿配對試

驗(yàn))。

b. 按【F2】鍵選擇試驗(yàn)?zāi)Ｊ剑ㄎ舛然蛲高^率） 圖 103 所示.48

c. 按【SETλ】鍵選擇測試波長.圖 104 所示。

c．1 對單參比單樣品測試，將參比放入一號樣品槽位，樣品放入二號樣品槽

位，按【START】鍵. 儀器自動(dòng)到一號樣品槽位調(diào)空白，然后到二號

樣品槽位測樣品，最后將測試結(jié)果一組顯示在屏幕上；

c．2 對一參比二樣品測試，將參比放入一號樣品槽位，二樣品分別放入二號

樣品槽位和三號樣品槽位，按【START】鍵. 儀器自動(dòng)到一號樣品槽

位調(diào)空白，然后分別到二號樣品槽位和三號樣品槽位測樣品，后將測試結(jié)果二組顯示在屏幕上； 

c．3 對一參比三樣品測試，將參比放入一號樣品槽位，三樣品分別放入二號

樣品槽位，三號樣品槽位和四號樣品槽位，按【START】鍵. 儀器自

動(dòng)到一號樣品槽位調(diào)空白，然后分別到二號樣品槽位，三號樣品槽位

和四號樣品槽位測樣品，最后將測試結(jié)果三組顯示在屏幕上；

c．2 四參比四樣品-比色皿配對試驗(yàn)，將四個(gè)參比分別放入一號樣品槽位，

二號樣品槽位，三號樣品槽位和四號樣品槽位，然后按【0Abs/100%T】

鍵，儀器分別到四個(gè)槽位調(diào)空白并將四個(gè)空白值存起來，這時(shí)將四個(gè)

參比取出，分別將對應(yīng)的四個(gè)樣品放入四個(gè)槽位，后按【START】

鍵. 儀器分別到四個(gè)槽位作出測試并將結(jié)果顯示與屏幕上，圖 105.49